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基本概念:
荧光定量PCR是通过实时监测荧光信号的变化来检测PCR扩增反应中产物的积累。检测方法主要包括:染料法(SYBR Green I)和探针法(Taqman probe)。结果分析方法主要有:相对定量(2-ΔΔCt法,标准曲线法)和绝对定量(标准曲线法)。
为青生物提供mRNA定量检测服务,miRNA定量检测服务,lncRNA定量检测服务,环状RNA定量检测服务。同时提供多重taqman检测体系的建立及检测服务。
实验流程:
1 样品mRNA提取并进行逆转录
2 引物设计,合成,调试
3 少量样品预实验
4 正式实验,收集数据
5 整理分析数据,发送正式实验报告
服务优势:
1 采用专业的试剂盒提取mRNA,结果更准确
2 进行四复孔实验,去除差异最大的一个数据,使三复孔的数据标准差90%以上小于0.4
3 在正式实验的过程中,全程通过阴性对照监测污染
4 整理分析数据,节省了分析数据的时间
结果报告:
样品mRNA提取电泳图和OD值检测
定量PCR原始数据
引物调试的扩增曲线、溶解曲线、琼脂糖电泳和引物扩增效率
样品正式实验的扩增曲线和溶解曲线
数据整理、分析
实验过程中所用到的仪器、试剂、软件、算法
服务流程:
1 订单洽谈,确定实验方案,包括需要检测的序列或者基因名,样品的数量、类型。
客户提供:
样本
细胞:细胞数>106;
组织:总量>100 mg;
DNA 或RNA 样品:总量>2 μg。
基因信息
基因序列或GenBank登录号等
2 正式实验,包括RNA提取,逆转录,引物设计,合成,验证,正式实验等,对实验难度较大,进展缓慢的订单,发送阶段性实验报告,包括RNA提取报告,引物调试报告,预实验报告等。
3 数据整理分析,发送正式实验报告。