多种分型平台

直接测序分型方法

连接酶检测反应（LDR）分型方法

多重SnapShot 分型方法

Taqman探针分型方法

服务优势

1. 高质量完成数百万个实验数据

2. 已服务客户发表SCI文章近百篇

3. 已成功完成猴子、贝类、鱼类等非常规种属样品的SNP分型

4. 已完成脑血管、各种癌症、高血压、乙型肝炎等疾病相关位点几千个

主要服务方案

1. 直接测序法

将待检测片段进行PCR扩增并直接测序是SNP检测方法中最准确的方法。纯合位点为单峰，而杂合峰为套峰，因而很容易将几种基因型区分开来。直接测序法不仅可用于对已知位点的检测，还可用于发现未知的SNP位点。

2. 连接酶检测反应(LDR)分型方法

技术原理：主要应用连接酶检测反应 (ligase detection reaction，LDR)技术。即在Taq DNA连接酶的作用下，当左右两条寡核苷酸探针与目的DNA序列完全互补，并且两条探针之间没有空隙时才能发生连接反应，否则连接反应不能进行，最后通过毛细管电泳，扫描片段长度，实现对SNP 位点的检测。

3. 多重SNaPshot SNP分型方法

技术原理：SNaPshot SNP分型是一种以单碱基延伸原理为基础，同时利用多重PCR对多个已知SNP 位点进行基因分型的方法。在一个含有测序酶，四种荧光标记的ddNTP，紧挨多态位点5’端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中，引物延伸一个碱基即终止，经ABI 3730XL 测序仪进行毛细管电泳后，根据峰的颜色可知掺入的碱基种类，从而确定基因型，根据出峰位置确定该延伸产物对应的SNP位点。

4.Taqman 探针方法

在PCR 反应系统中加入2 种不同荧光标记的探针，它们可分别与2个等位基因完全配对。正常情况下，由于探针5′端荧光基团和3′端淬灭基团紧邻在一起，荧光被淬灭。随着PCR 的有效进行，与模板完全配对的探针逐步被Taq DNA 聚合酶5′→3′外切酶活性切割，致使探针5′端上的荧光基团与3′端的淬灭基团分离，淬灭效应解除，报告荧光基团被激活；而与模板不能完全配对的探针（代表另一种等位基因）不能被有效切割，故检测不到荧光信号，通过相应仪器检测荧光值的变化即可实现SNP位点检测。

服务流程

l 课题的设计咨询包括检测位点的选取

l 根据实验通量选用不同分型方法

l DNA样本的质检

l SNP分型所用引物和探针的设计、合成与优化

l SNP分型及数据分析

客户提供信息及样品

1. SNP位点信息：

人类基因组需SNP位点的rs号；其它物种如牛、鸡、鱼等无rs号的，需SNP位点上下游各200bp的确切序列，SNP位点的突变类型，以及位点的上下游25bp内是否存在其它位点。

2. 分型样品：

（1）若分型样品为基因组DNA或质粒DNA ，样品要求：DNA浓度≥20ng/ul，体积>10ul，位点较多的按照1ul/位点计算。纯度 OD 260/OD280 在1.7～1.9之间。由于样品质量差异过大导致的成功率下降，由客户负责。如果要求提供样品纯化服务，我们对每个样品将收取纯化费。

（2）若分型样品为血样，样本要求：血液样品，体积大于500ul，需用抗凝剂抗凝，送样过程中请注意保持低温，防止DNA降解；血斑样品，9-25mm2大小的血斑两个以上。对每个血样或血斑样本将收取DNA提取费。

（3）客户在寄送样品的时候，应在送样包裹中放置足量的冰袋，以减少在运输过程中因温度变化导致DNA降解的可能。请在每次寄出样品后及时与本公司分型部联系，可以E-mail 或者传真的方式告知样品的详细信息，以便收到样品后能及时与您进行联系确认。

客户将得到结果

★SNPs分型结果（Excel表格）

★原始数据（SNP峰型图）

★完整实验报告包括扩增和反应的体系，所涉及的引物、探针序列等